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              細胞傳代實驗
            1. 發布日期:2024-01-10      瀏覽次數:144
              • 所需材料:裝有75%醫用消毒酒精的酒精噴壺、PBS緩沖液、胰酶、含血清培養基、巴氏吸管、移液器、離心管、廢液缸,以及擁有基礎設施的細胞間。

                操作步驟:
                1.紫外照射滅菌后,我們應該穿好滅菌服,戴好滅菌手套和口罩。
                2.從培養箱取出細胞培養瓶(一般選擇處于對數期的細胞),用酒精噴壺在培養瓶表面噴灑75%酒精消毒,轉移培養瓶到超凈臺。
                3.打開蓋子,輕輕吸出舊的培養液,用巴氏吸管加入適量PBS緩沖液洗滌1-2次(注意從側壁加入,以免沖掉細胞),棄去PBS緩沖液。
                4.可用移液器加入1-2ml胰酶(具體量根據實驗需要確定,此處僅為參考用量),“十字"晃動,使胰酶充分接觸細胞。
                5.將加入胰酶的細胞培養瓶轉移到倒置顯微鏡載物臺,鏡下觀察細胞消化情況,當細胞變圓且大量脫落時,準備終止消化,用75%的酒精噴灑培養瓶表面,轉移到超凈臺。
                6.用移液器(或巴氏吸管)加入等量含血清培養基,終止消化。移液器(或巴氏吸管)充分吹打(動作也不要太猛,畢竟細胞也是蠻脆弱的),使細胞能夠脫落。
                7.將培養瓶中混合液體轉移至離心管中(離心管規格根據實驗需要確定),配平,離心5分鐘左右(離心機轉速根據細胞種類而定,常見的有1000rpm/min)。
                8.離心好后,用酒精噴壺噴灑離心管表面,轉移進超凈臺,打開蓋子,將上清液倒入廢液缸。
                9.加入適量體積含血清培養基,用移液器或巴氏吸管輕輕吹打,制成細胞懸液。
                10.將細胞懸液分裝進2個(或多個)潔凈滅菌培養瓶,加入適量培養基,蓋好蓋子將分裝好的培養瓶置于倒置顯微鏡載物臺,觀察細胞情況,細胞應保證一定數量,數量太少會影響生長情況。
                11.在培養瓶上做標記,注明傳代時間,細胞種類,操作人員等信息。在放入培養箱之前應再次用酒精噴一噴培養瓶表面,然后應記得整理操作臺,用75%酒精擦拭超凈臺臺面,清理廢液和垃圾。


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